琼脂糖凝胶小片段DNA
小量回收试剂盒
（树脂·离心柱型）
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试剂盒内容 |
50次 货号cat:FG030 |
100次货号cat:FG040 |
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树脂溶胶液 Matrix-Gel-lysis |
35 ml |
70 ml |
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漂洗缓冲液 Wash Buffer |
15 ml |
30 ml |
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洗脱缓冲液 Elution Buffer |
15 ml |
15 ml |
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吸附柱 Spin Column |
50 |
100 |
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收集管 Collection Tube(2ml) |
50 |
100 |
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说明书 Specification |
1 |
1 |
贮存条件：
室温，有效期一年。 产品简介
※ GalaxyBio公司与由美国公司通力合作，由美方公司提供全方面技术、关键纯化材料，将核酸纯化等系列产品，在国内推广，实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关，已达到进口产品的品质，而价格上却是国产试剂盒的价位。
※ 目的DNA带从凝胶上切下来后，通过溶胶液溶胶，树脂吸附柱吸附，DNA便可用去离子水（或低盐缓冲液）洗脱出。能从各个等级的琼脂糖凝胶中回收到20bp-40kp的DNA带，且回收率达85％，在低浓度凝胶可达95%。
※ 回收片断范围较广，特别是对于小于100bp的片断，优于硅胶膜。
※ 标准量的树脂，最大吸附量为60ug，实验结果可重复性好。
※ 纯度好， 直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
操作步骤：
1. 试验前准备及注意事项
Wash Buffer 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
2. 切胶 将琼脂糖凝胶电泳后的单一目的片段切出（尽量切除多余部分），放入1.5 ml灭菌离心管中，称其重量。
3. 溶胶 用力振荡树脂溶胶液，使得树脂完全悬浮。加入6倍体积（体积比，0.1 g凝胶视为100 µl），室温放置15分钟、或37℃30分钟、或65℃加热5-10分钟使胶块完全融化。
注意：应彻底溶解，否则会影响回收效果
4. 吸附 待液体降至室温（温度越低，回收效果越好），充分混悬树脂，全部转入吸附柱中， 12,000转/分 离心30秒，弃去离心管中液体。
5. 漂洗 将700μl的Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中，12000rpm离心30-60秒，弃滤液。
6. 再漂洗 将500μl的Wash Buffer加入Spin Column中，12000rpm离心30-60秒，弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟，除去残留乙醇。
7. 洗脱 将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上，在吸附柱Spin Column膜的中央处加入50-100μl的水或洗脱缓冲液Elution Buffer，室温静置1分钟，12000rpm离心1分钟洗脱DNA，可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
注意：Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应，。把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率，如果提取的质粒>10kb，请将洗脱液预热至60℃，并适当延长洗脱时间。
注意事项：
1.电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
DNA浓度和纯度检测
OD260值为1，相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8，如果洗脱时不使用缓冲液，而使用去离子水，由于受PH值和离子浓度的影响，比值会偏低。
常见问题分析及解决方案
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可能问题 |
可能原因 |
建议解决方法 |
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低DNA 产量 |
加入太少量的溶胶液 |
错误判断割下的琼脂糖凝胶的体积，按照使用说明加入足够量的溶胶液。 |
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琼脂糖凝胶不能完全溶解于溶胶液 |
确保水浴温度在50℃以令凝胶完全溶解. |
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TAE 电泳缓冲液不新鲜 |
使用新鲜配制的缓冲液,这样不仅可以增加产量,也可防止提取到的DNA 被污染. |
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柱子堵塞 |
琼脂糖凝胶没有完全溶解在溶胶液 |
凝胶薄片(>0.3ml) ,我们建议把胶切成更碎的小块以帮助溶解. |
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无DNA |
漂洗液没有用无水乙醇稀释 |
按照使用说明来准备好漂洗液. |
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加入的溶胶液体积不适合 |
对于＜200bp的DNA 片断,加入6 倍体积的溶胶液 |
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OD 值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符 |
从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260 的值 |
确保是按照步骤5和6的方法来洗涤柱子.另一方面,还取决于琼脂糖/EB电泳的量. |
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点样时样品漂出孔外 |
在洗涤完之后没有把柱上的乙醇完全除去 |
按步骤7 的说明离心柱子以甩干之,然后再进行下面的洗脱步骤. |
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