●产品简介     

※  Galaxybio 公司研发的活化HRP，对优质辣根过氧化物酶次序偶联，再活化，使辣根酶富含活性基团。一经活化的HRP，极易和含氨基NH2的小分子或蛋白氨基NH2的共价结合。因此使用本方法标记物，具有标记率高、活性好、本底低及非常敏感等特点。敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。微量包装的活化HRP，特别适合科研用的昂贵抗体的标记。也适合抗体抗原活性的检测。

※  一步标记，简便快速。与待记抗原或抗体混合后（约12个小时过夜标记或37℃2小时。）

※  可以微量标记，节省昂贵的抗原抗体

※  无需透析，即时使用；

※  标记率极高，可大于95%；敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。

※  本试剂盒针对氨基进行标记，故只对含有氨基的分子。可以进行抗原或其他蛋白的标记。小分子的标记，如瘦肉精、DNA、多肽等等，标记时，如要提高HRP的利用率，可以加入过量的小分子，然后透析除去游离的小分子；如果要即时使用，参考蛋白抗原的标记，减少小分子的用量，从而减少游离的小分子。

※  本底远远低于其它方法。

●注意事项：

1. 抗原抗体如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris缓冲液中，需以PBS缓冲液充分透析，也可以超滤离心管进行超滤；微量的含NH2 的小分子，会严重影响标记率。

2. 反应体系一般100μl～300ul /1mgHRP；太小，可能发生自身交联；也不要太大，太大会影响标记率。

3. REAGENT Ⅲ 终止液，封闭残余活化基团。

4. 注意反应 pH值约维持在9.5左右。pH值太低，多加反应启动剂。

 

5.特别提醒，是后续试验中，酶标板条种类不同，本底差异特别大。当本底高时，以较高浓度蛋白溶液封闭的酶标板，同时把酶标稀释液的蛋白浓度加大。如果问题依旧存在，请联系我们技术咨询。

6 本试剂仅用于科学研究；

●操作步骤：

        1. 准备待标记物：以蒸馏水或超纯水把待标记物溶解成约1mg/ml。

2. 取100ul抗体溶液（1mg/ml）转入REAGENT Ⅰ活化辣根氧化物酶。

※简短离心，使辣根过氧化物酶沉到管底，辣根酶管壁上的干粉HRP要完全冲洗溶解。

※总的反应体系控制在100ul/mg活化HRP左右，体系增大影响标记率。

※按照按mg活化HRP对应抗体100ug～500 ug、抗原50ug～250ug，HRP：X的分子mol比保持在30:15～1左右。

3. 以REAGENTⅡ调pH值至9.5左右（大约10ul，因抗体用的缓冲液的差别，量有所不同，但确保PH在9.0以上，可以多加REAGENTⅡ，并准确记录REAGENTⅡ的使用量，以备下一步用）。 37℃2小时、或4℃过夜。 

※检测PH的方法：取一新管尖，吸取标记物溶液，然后排尽液体，拿管尖点在PH试纸上，比对即可。

4. （备选步骤）加入微量硼氢化钠。（适合酶标物长期放置的，即时使用无需添加。取200ul的枪头，插入硼氢化钠粉末，在管尖处有看得见白色粉末，再转移到酶标物物，吹打溶解混匀即可）。

5. 加入REAGENTⅢ（约3倍体积的REAGENTⅡ。例如上一步用去REAGENTⅡ10ul，这一步加入REAGENTⅢ30～50ul。但确保酶结合物PH在7.0左右，可以多加REAGENTⅢ调整），混匀终止反应。

6. （备选步骤，甘油能更好稳定酶结合物活性）加甘油至50%，-20℃保存。

注：如果抗原（或抗体）为溶液状态，从步骤2开始操作。

特别提醒:后续试验中，酶标板条种类不同，本底差异特别大。当本底高时，以较高浓度蛋白溶液封闭的酶标板，同时把酶标稀释液的蛋白浓度加大，增加洗涤次数。如果问题依旧存在，请联系我们技术咨询。

推荐使用：包被了蛋白、或抗原、或抗体的酶标板的稳定，和稀释液的抗原或抗体的稳定，请购买本公司的相关产品。底物显色，本公司提供单组分TMB

和双组分TMB AB液，4～8℃可稳定数年。