※  本试剂盒采用经典的SDS碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅胶膜在高盐低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅胶膜上洗脱。

※  采用进口硅胶膜，吸附量大，产率高，实验结果可重复性好。

※  溶液中添加了进口作用指示剂，使每一步作用程度一目了然。

  ※  快速、方便，从1～5 ml大肠杆菌LB（Luria Bertani）培养液中，可快速提取15-40 ug纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达85～90%。

  ※  获得的质粒产量高，超螺旋比例高、纯度好。 直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

1.试验前准备及注意事项

 a. 溶液S1 Resuspension Buffer 使用前将RNase A全部加入（使用前离心），均匀混合后4℃保存并标示。

 b. 漂洗缓冲液 Wash Buffer 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。

     c. 使用前检查溶液S2，若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。S2可以在手握不烫手时使用。

     d. 溶液S2 Lysis Buffer及洗脱液用后拧紧瓶盖。

2. 收菌  取1～5ml过夜培养的菌液，12000rpm离心1分钟，尽弃上清。

    注意：一般高拷贝质粒用1-3ml菌液，低拷贝质粒用2-10ml菌液。若使用大体积菌液，请相应加大各溶液的体积。

3.  重悬菌液  将250ul溶液S1 Resuspension Buffer (已加RNase A)加入菌液沉淀，Vortex充分悬浮细菌沉淀。

注意：请充分重悬细菌，若不充分会导致碱裂解不完全。

4.  碱裂解  将250ul溶液S2 Lysis Buffer 加入细菌重悬液，温和地上下翻转混合6～10次，使菌体充分裂解，直至溶液变得清亮。

    注意：此步请轻柔混合，剧烈混合如Vortex会导致基因组DNA断裂，从而污染质粒DNA。

5.  中和  加入350ul溶液S3 Neutralization Buffer,立即轻柔地上下翻转混合直至蓝色彻底消失。室温放置5分钟。室温12000rpm离心10分钟。

6.  柱结合  将上述操作的上清液转移至吸附柱Spin Column中，13000rpm离心1分钟，弃滤液。

8.  漂洗  将700μl的漂洗缓冲液 Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中，12000rpm离心30-60秒，弃滤液。

9.  再漂洗  将700μl的漂洗缓冲液 Wash Buffer加入Spin Column中，12000rpm离心30-60秒，弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟，除去残留乙醇。

10.  洗脱  将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上，在吸附柱Spin Column膜的中央处加入30-100μl的PH8.5灭菌水或洗脱缓冲液Elution Buffer，室温静置1分钟，12000rpm离心1分钟洗脱DNA，可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。

    注意：洗脱缓冲液 Elution Buffer组成为10mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应；可以pH8.5灭菌水替代；也可以含有1 mM EDTA的Buffer TE Buffer洗脱，有助于稳定DNA.洗脱液加热60℃使用时有利于提高洗脱液效率，如果提取的质粒>10kb，请将洗脱液预热至60℃，并适当延长洗脱时间。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

   OD260值为1，相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。

   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8，如果洗脱时不使用缓冲液，而使用去离子水，由于受PH值和离子浓度的影响，比值会偏低。