EZ-RNA-B1
血液总RNA小量快提试剂盒
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试剂盒内容 |
50次
Cat：RN310 |
250次
Cat: RN318 |
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Miniprep column |
50 |
50×5 |
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2 ml microfuge tube |
50 |
50×5 |
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溶液EL Solution EL |
140 ml |
140 ml×5 |
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溶液RLT Buffer RLT |
15 ml |
15 ml×5 |
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溶液RN2 Buffer RN2 |
5 ml |
5 ml×5 |
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溶液RW1 Buffer RW1 |
40 ml |
40 ml×5 |
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溶液RPE Buffer RPE |
15 ml |
15 ml×5 |
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RNase-free Water |
10 ml |
10 ml×3 |
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说明书 Protocol |
1 |
1 |
贮存条件：
室温，有效期2年。
产品简介：
※ GalaxyBio 公司与国际知名品牌公司通力合作，由对方提供全方面技术、关键纯化材料，将核酸纯化等系列产品，在国内推广，实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关，已达到进口产品的品质，而价格上却是国产试剂盒的价位
※ 采用独特的细胞裂解沉淀技术，快速、方便，高得率、高纯度。可从200μl-400μl的血液中快速提取高质量的RNA。
※ 提取的RNA分子完整、纯度高，适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
注意事项:
1. 所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管，以避免提取过程中RNA被RNase降解。
2. 试剂含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水和生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
3.试验中需要异丙醇和乙醇，请提前准备RNase-free的异丙醇和乙醇。
操作步骤：
1.试验前准备及注意事项
试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在溶液RW1 和溶液RPE中加入无水乙醇，并做好标记；溶液使用后，避免长期暴露于空气中，用后请及时盖紧盖子,密闭保存。
2. 200-400 μl 全血加入3-4倍 Solution EL在离心管中混匀。
* 如果血样的体积在200-400 μl之间，适当调整加入Solution EL的体积。
3. 冰浴10-15 min。冰浴期间，温和混匀2次。3,000×g 离心5 min。用吸头尽可能丢弃上相。
* 4℃条件下离心。
4. 再加入0.5 ml-1ml Solution EL，温和混匀，冰浴5 min。
* 如果血样的体积在200-400 μl之间，适当调整加入Solution ELL的体积。
* 此步骤可重复，尽量裂解除去红细胞。
5. 3,000×g 离心5 min，尽量弃去上清，。
* 4℃条件下离心。
6. 加入250 μl Buffer RLT，用吸头抽吸，混合均匀。
7. 加入80μl Buffer RN2，振荡混匀10S, 12,000×g 离心10 min。
* 4℃条件下离心。
8. 取上清至1.5 ml离心管中。加入等体积无水乙醇，混合均匀。
步骤9-13可选择离心法或负压法
A. 离心法
9A. 将制备管置于2 ml (试剂盒内提供) 离心管中，转移步骤8中的混合液到制备管中，6,000×g离心1min。
* 4℃条件下离心。
10A. 弃滤液，将制备管弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，制备管中加入700 μl Buffer RW1，12,000×g离心1 min。
* 确认在Buffer中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
11A. 弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，在制备管中加入700 μl Buffer RPE，12,000×g离心1 min；以同样的方法再用700 μl Buffer RPE洗涤一次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
12A. 弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，12,000×g离心1 min。
13A. 将制备管放入干净RNase-free的1.5 ml离心管中，在制备管膜中央加60-100 μl Buffer RTE (DNase﹠RNase-free) 。室温静置1 min，12,000×g离心1 min，洗脱得RNA
B. 负压法
9B. 将制备管插到负压装置的插口上，将步骤8中的混合液移入制备管中，开启并调节负压至-20-30英寸汞柱，吸尽管中溶液。
10B. 保持负压，加入700 μl Buffer RW1，吸尽管中溶液。
* 确认在Buffer Buffer RW1中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
11B. 保持负压，沿管壁四周加入700 μl Buffer RPE，吸尽管中溶液；以同样方法再用700 μl Buffer RPE洗涤一次。
* 确认在Buffer Buffer RPE中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
12B. 将制备管置于一个2 ml离心管（试剂盒内提供）中，12,000×g离心1 min。
13B. 将制备管放入干净RNase-free的1.5 ml离心管中，在制备管膜中央加60-100 μl Buffer TE (DNase﹠RNase-free) 。室温静置1 min，12,000×g离心1 min，洗脱得RNA。
RNA定量及纯度检测
总RNA 的定量和定性分析: 所有标本均经紫外分光光度仪检测所提取总RNA 的浓度及纯度,ODA260/ODA280 的值为1.7～ 2.0。 | 
