说明：考马斯亮兰法（Bradford法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
包装：
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货号Cat： |
包装规格 |
微孔检测 |
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WB041 |
考马斯亮兰法 25 ml
BSA（50mg/ml） 5ml |
125次 |
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WB042 |
考马斯亮兰法 100ml
BSA（50mg/ml） 25ml |
500次 |
保存： BSA蛋白标准-20℃ 其他2℃-8℃
实验步骤
1. 从冰箱取出考马斯亮兰溶液，平衡至室温并混匀；预热分光光度计20分钟或酶标仪。
2. ⑴ 蛋白标准需要新鲜稀释配制（蛋白标准稀释后，请立即使用，余下废弃，不可再用），
取20ul蛋白标准，加入980ul稀释液配制成1mg/ml蛋白标准。为减少稀释产生误差，总体积不可太小。同时为保持样品和标准测定条件同一，蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。一般要求，可以用0.9%NaCl、PBS或水直接稀释标准品。
⑵以分光光度计测;准备九支管，分别编号，按下列顺序加样。
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编号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
8 |
6 |
7 |
8 |
9 |
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去离子水µl |
100 |
90 |
80 |
60 |
40 |
20 |
0 |
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蛋白标准µl |
0 |
10 |
20 |
40 |
60 |
80 |
100 |
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样品µl |
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100 |
100 |
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考马斯亮兰溶液ml |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
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混匀、，2~5分钟后，以第1号试管为空白对照595nm，测定各样品收值A595，样品管8、9取平均值 |
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相当浓度mg/ml |
0 |
0.1 |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.8 |
1.0 |
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注：样品和试剂比可以按比例放大或缩小。微孔检测时，可以按比例缩小，但总体积不小于100ul。
性能指标：
在20～1200ug/ml有着比较好的线性。当吸光度大于0.8A时，请把样本稀释后再做。
注意：
1.最好使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色用完后可以乙醇反复清洗。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。
2.本方法标准曲线有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定
3.比色顺序从蛋白浓度低的管开始，中间不必清洗比色杯，以免影响结果。
4.疏水蛋白或粘蛋白，可能与染料发生沉淀，加入等体积1N NaOH 可以消除。
5.如果知道样品的蛋白大体浓度，可以采用相近的3管做标准曲线。
6.由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作 标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
7.有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的NaOH。（如同0.1N的酸干扰Lowary法一样）
﹡﹡﹡﹡﹡本品具有腐蚀性，如有皮肤或眼睛接触，请用大量水冲洗或就医﹡﹡﹡﹡﹡
