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      PK-BDC血液基因组DNA提取试剂盒(蛋白酶K、离心柱型)

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
GM11050380元
GM11050+蛋白酶K420元
GM1202501400元
GM120250+蛋白酶K1600元

PK-BDC血液基因组DNA提取试剂盒(蛋白酶K、离心柱型)

PK-BDC
血液基因组DNA提取试剂盒
(蛋白酶K、离心柱型)
 
试剂盒内容
50
Cat:GM110
250
Cat:GM120
溶液EL Solution EL
140 ml
140 ml×5
溶液BL  Solution BL  
60ml
60 ml×5
溶液W1  Buffer W1
20 ml
20ml×5
溶液W2  Buffer W2
15 ml
15ml×5
溶液TE   Buffer TE
10 ml
10ml×5
溶液NS   SolutionNS
15 ml
15 ml×5
蛋白酶K(20mg/ml)
1ml
1ml×5
吸附柱     Spin Column
50
250
收集管  Collection Tube 
50
250
说明书     Specification
1
1
 
贮存条件:
蛋白酶K -20℃保存,有效期一年。其他室温保存。
 
 
产品简介:     
※  快速、方便,高得率、高纯度。一小时内可从100μl-1000μl的血液中快速提取4-30μg高质量的基因组DNA 见下表。
材料
提取量
DNA得量
哺乳动物全血
100μl—1ml
3—30μg
禽类、两栖类全血
5—20μl
5—40μg
※  采用进口硅胶膜,吸附量大,产率高,实验结果可重复性好。
  ※  提取的DNA可直接用于PCR/Real time PCR、限制性酶切、Southern blot、测序、mutant analysis和SNP等下游应用实验。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
 a. 试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在Buffer W1Buffer W2中加入无水乙醇,并做好标记;溶液使用后,避免长期暴露于空气中,请及时盖紧盖子,密闭保存。
 b. 若溶液BL中有沉淀,可在 56 ℃ 水浴中重新溶解,摇匀后使用
c. 使用前,请将水浴锅调整70℃,并将Buffer TE 置于70℃预热。
2. 处理血液材料(本产品适用于处理已添加抗凝剂的100μl1ml 血液样品
当血液样品体积超过 200 μl 时,在样品中加入1~2.5倍体积的细胞裂解液EL ,颠倒混匀, 10,000 rpm (~ 11,500×g )离心 1 分钟,吸去上清,留下细胞核沉淀(如果裂解不彻底,可重复以上步骤一次),向离心收集到的细胞核沉淀中加 200 μl溶液NS ,振荡至彻底混匀。
注意:当血液样品体积小于 200μl时,可加缓冲液NS 补足体积至 200μl再进行下一步细胞裂解实验(如血液样品体积为 200μl,可直接进行下一步实验,不需加入溶液NS)。请及时盖紧盖子,密闭保存。
         如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量 5 20 μl ,可加溶液NS 补足 200μl 后进行下面的细胞裂解步骤。
2. 加入 20μl 蛋白酶 K 溶液,混匀。(蛋白酶K可根据血量或白细胞量适当增减)
注意:如果需要去除 RNA ,可加入 4μl RNaseA ( 100 mg/ml )溶液(用户自备 ) ,振荡15秒,室温放置 5 分钟。
 
 
 
3. 加 200 μl溶液BL,充分颠倒混匀, 56 ℃ 放置 10 分钟,其间颠倒混匀数次,溶液应变清亮(如溶液未彻底变清亮,请延长裂解时间至溶液清亮为止)。
注意:加入溶液BL时可能会产生白色沉淀,一般 56 ℃ 放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提DNA 量少和提取出的 DNA 不纯。当血液体积200ul 且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。
4. 加 200μl 无水乙醇,充分颠倒混匀,冷却至室温。此时可能会出现絮状沉淀。(涡旋震荡10s可以提高收率)
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱(吸附柱放入收集管中) , 12,000 rpm (~13,400×g )离心 30 秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入700μl Buffer W1 (使用前请先检查是否已加入无水乙醇) , 12,000 rpm (~ 13,400×g )离心 30 秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
7. 向吸附柱中加入 700 μl Buffer W2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇) , 12,000 rpm (~ 13,400×g )离心 30 秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中。
8. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer W2  , 12,000 rpm (~ 13,400×g )离心 30 秒,倒掉收集管中的废液。
9. 将吸附柱放回收集管中, 12,000 rpm (~ 13,400×g )离心 2 分钟,倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。
10. 将吸附柱转入 1.5ml 离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加50—200μl Buffer TE,室温放置 2—5 分钟(70℃保温得率更高), 12,000 rpm (~ 13,400×g )离心 2 分钟,将溶液收集到离心管中。
注意:若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7 .08 . 5 范围内(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围) , pH 值低于 7 . 0 会降低洗脱效率:且 DNA 产物应保存在 -20 ℃ ,以防 DNA 降解。
 
 
 
 
 
 
DNA定量及纯度检测
OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
 
常见问题
 
可能原因
解决方法
未得到DNA
漂洗缓冲液和溶液PP使用前未加入无水乙醇
请按试剂瓶标签说明在Buffer W1Buffer W2中加入无水乙醇,并做好标记。
DNA产量低
裂解不完全
加入蛋白酶K和溶液BL后请立即充分混匀。
确保初始血液用量≤1000μl。
确保操作中加入蛋白酶K。
延长裂解时间。
血液样品中白细胞浓度较低
 
将血液样品4,000rpm室温离心10分钟。离心后样品将分为三层,直接吸取20-50μl中间层作为初始材料进行操作。
初始材料质量不高
使用新鲜或冷冻的血液样品。
蛋白酶K活性降低
蛋白酶K每次使用完毕立即冻存于-20℃。
洗脱缓冲液使用不当
使用70℃预热的洗脱缓冲液。
离心时吸附柱堵塞
血液样品中白细胞浓度大于1×107个/200μl
减小血液样品的初始用量。
样品反复冻融过程中,血浆中产生冷凝蛋白
将采集样品分成小份储存,尽量不使用反复冻融的血液作为初始材料。
 

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