超纯总RNA快提试剂盒
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试剂盒内容 |
50次
Cat：RN410 |
250次
Cat: RN420 |
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Miniprep column |
50 |
50×5 |
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2 ml microfuge tube |
50 |
50×5 |
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溶液RN1 Buffer RN1 |
25 ml |
25 ml×5 |
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溶液RN2 Buffer RN2 |
25 ml |
25 ml×5 |
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溶液RW1 Buffer RW1 |
40 ml |
40 ml×5 |
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溶液RW2 Buffer RW2 |
15 ml |
15 ml×5 |
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溶液RT Buffer RT |
10 ml |
10 ml×3 |
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说明书 Protocol |
1 |
1 |
贮存条件：
室温或4℃，有效期2年。
产品简介：
※ GalaxyBio 公司与美国公司通力合作，由美方提供全方面技术、关键纯化材料，将核酸纯化等系列产品，在国内推广，实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关，已达到进口产品的品质，而价格上却是国产试剂盒的价位
※ 采用独特的组织细胞裂解沉淀技术，快速、方便，高得率、高纯度。
※ 提取的RNA分子完整、纯度高，适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
注意事项:
1. 所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管，以避免提取过程中RNA被RNase降解。
2. 试剂含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水和生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
3.试验中需要异丙醇和乙醇，请提前准备RNase-free的异丙醇和乙醇。
操作步骤：
1.试验前准备及注意事项
1）试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在溶液RW1 和溶液RW2中加入无水乙醇，并做好标记；溶液使用后，避免长期暴露于空气中，用后请及时盖紧盖子,密闭保存。
2）所有样品处理，可以振荡混匀，禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。
2.样品处理
1）液体标本： 血清、血浆、脑脊髓液、分泌液、唾液、腹水、液体粪便、其他分泌物等，12,000×g离心5min，取上清约300ul体积的样品，加入
400 μl Buffer RN1，混合均匀，冰浴5 min。（样品较少时，Buffer RN1和RN2按比例同时增减) 。
2）液体标本浓缩处理（适合样品少的标本）
取适当体积的液体标本，加入同体积的异丙醇，12,000×g离心10 min，尽量弃去上清。加入400μl Buffer RN1，用吸头抽吸，混合均匀，冰浴5 min。
3）眼、鼻、喉等拭样（适合样品少的标本）
a.将拭样转移到离心管中，加入2 ml PBS (或生理盐水，用户自备)，4℃浸泡2～5h；
b.入同体积的异丙醇，12,000×g离心10 min，尽量弃去上清
c.入400μl Buffer RN1，用吸头抽吸，混合均匀, 冰浴5 min.
4）从培养贴壁细胞中提取病毒RNA：尽量倒掉培养上清后，不须消化，直接加入Buffer RN1体积按10cm2/ml比例加入。混合均匀, 冰浴5 min
5）从悬浮细胞中提取病毒RNA：可直接离心收集细胞，每400ul Buffer RN1可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞（需要特殊处理的细胞如植物、酵母等等参照本公司相应试剂盒）。混合均匀, 冰浴5 min
3. 加入400ul Buffer RN2，振荡混匀，大约 12,000×g 离心10 min。
* 4℃条件下离心。
4. 取上清至1.5 ml离心管中，加入0.6体积的异丙醇（或加入1体积无水乙醇），混合均匀。
步骤5-9可选择硅胶膜吸附法或离心沉淀法：
* 硅胶膜吸附法与离心沉淀法相比，前者更纯净，而后者提取量大，如病毒拷贝较少时，可采用后者。
A. 硅胶膜吸附法
5A. 将制备管置于2 ml (试剂盒内提供) 离心管中，转移步骤4中的混合液到制备管中，6,000×g离心1min。
* 4℃条件下离心。
6A. 弃滤液，将制备管弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，制备管中加入700 μl Buffer RW1，12,000×g离心1 min。
* 确认在Buffer中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
7A. 弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，在制备管中加入700 μl Buffer RW2，12,000×g离心1 min；以同样的方法再用500μl Buffer RW2洗涤一次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
8A. 弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，12,000×g离心3 min。
9A. 将制备管放入干净RNase-free的1.5 ml离心管中，在制备管膜中央加30-100 μl Buffer RT(RNase-free) 。室温静置1 min，12,000×g离心1 min，洗脱得RNA
B. 离心沉淀法
5B. 12,000×g离心10 min，尽量弃去上清。
6B. 加入700 μl Buffer RW1，2,000×g离心5 min。
* 确认在Buffer Buffer RW1中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
7B. 弃去管中溶液，加入700 μl Buffer RW2，2,000×g离心5 min。重复一次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
8B. 弃去管中溶液，自然干燥。
9B. 加入10-100 μlBuffer RT (RNase-free) ，溶解RNA。
RNA定量及纯度检测
总RNA 的定量和定性分析: 所有标本均经紫外分光光度仪检测所提取总RNA 的浓度及纯度,OD260/OD280 的值为1.7～ 2.0。
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